鳝哉！ @[email protected]

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有没有做分子的大佬，求助
我最近在做用来同源重组的质粒，到载体和片段连接的部分死活连不上。
插入片段有3个，一开始试着直接连连不上，所以用overlap PCR连成2 kb的一整个片段再和载体连。
载体线性化试了双酶切和反向PCR，6 kb左右(片段分别设计了重叠区域)。
连接方法是takara的infusion和ligation mix，反应完转化感受态，恢复培养后直接涂板。
抗生素浓度从低到高都试了，每次都是新制的板子。
感受态是DH5a，自己制备的(效率没问题)和商品化的也都试过了。是化学转化 。
转化后的板子要么是完全不长菌落，要么是空载…孩子真的要黔驴技穷了，求大佬们救救孩子(⁠´⁠；⁠ω⁠；⁠｀⁠)

我服了啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊

@wuyefeixing 封控结束以后一直到白纸运动全面放开的整整半年里，我都每天早上七点前到公司上班，为的是能够不被保安看到，从大楼和花坛之间的下水道钻过去，再从地下车库的电梯进入公司，以此躲过了每一次公司园区要求的核酸检查

今天是清明节，本尸体祝首页所有尸体节日快乐，尸体健康。

（以下根据我所在地加拿大/北美的行业法规）首先，这违反了咨询师伦理；其次，尤其当你也使用自己的社交媒体账户去接触咨询师时，你大概率暴露了自己最脆弱的一个小角落。作为咨询师不应该去主动探寻来访的社交媒体账户内容，但是如果咨询师通过这样的方式接触未来client，显然风险最大的是作为服务使用者的你。

尤其是，当咨询师本人将私人账户和专业账户混在一起，对来访尤其不利，因为来访很容易被操控。举个例子，如果你看到你的咨询师sns账号上更新了一条关于工作的小抱怨，你可能会想这是不是在说我？或者即使你知道和你无关，可能你也会想我会不会给对方带来了压力？又或者，在下一次你的咨询师出了某些错误时，你会想到那条觉得算了，ta也不容易（因为你有可能潜意识害怕成为导致对方发那条post的人）

即便，即便咨询师毫无此意，但你作为在咨访关系中相对更vulnerable的人，咨询师发的任何一条post都可能会间接操控你的情绪。更别说那种会在社交媒体上和来访互关互动的了，哪怕不互关，单单是互动本身就会向别人暴露谁是ta的来访，或者是某些平台无法隐藏follow和follower，那么也会很容易暴露隐私信息。

此外最最最需要警惕的是会在社交媒体上po出来访感谢信或者是记录来访内容的，哪怕隐藏了关键信息，这绝对违反规定，我不清楚大陆咨询师执业硬性规定，但至少这从伦理上也不对。

另外附上几条参考信息，p1-2是一位加拿大执业的同行老师给的分享（已经过对方同意发出），可以看到在加拿大安省的规定里，只要你的社媒账户说了你是咨询师就需要对账户所有发言完全负责，并且不会因为你用中文并且在中文平台上说话就免责。p2是这样的主动招徕来访的行为也是违反规定的。

p3是我在中文平台上看到过的还不错的一个咨询师社交媒体专业账户的disclaimer，p4是加拿大BC省心理学家协会出的社交媒体使用守则，也可以参考一下，其实最简单的就是通过这个账户是不是专业账户来首先判断这个咨询师有没有分不清专业和私人的界限，如果是专业账户，但是又不断暴露自己的私人信息or隐性暴露来访的可能信息，包括但不限于来访是从这个账号联系到ta的，来访同样活跃在这个账号的平台/是ta的互关或者粉丝等等。如果遇到这样的咨询师，不用怀疑，ta已经违反了行业伦理，如果ta在加拿大（别的国家我不敢下定论），你是可以report给相应协会的。

并不是说所有想要寻找咨询师的人都有义务了解这些，但互联网确实很容易让人落入陷阱，最近又实在看到太多违规的咨询师现身说法所以多嘴几句。

Disclaimer：本人非加拿大执业咨询师。

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【已开奖！此条更新为安利条】
简单概括一下这场游戏电影的精巧之处👇
·悬疑风格：一场事先声张的谋杀案，“缉凶”主题使人可以维持好奇心
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为了避免剧透写得很简短，总之十分乃至二十分地推荐大家游玩该游戏！如果条件有限或不确定是否想要购入，也可搜索一下【实况】（请尽量不要看精简的解说，个人认为很破坏体验...）进行这场游戏电影的观赏！
真的很感谢大家转发这条嘟文！请都来玩/看吧！

不知道为什么现在主流的论调都是以编制类比神佛位。B站tvb西游记解说，评论区总简单粗暴把成佛讲成考编制。
但从前故事里面的成佛，真的是一种非常残忍的事情。tvb西游记里面有多次类似场景的描写。红孩儿叩拜上普陀山，他的父母只能在塑像面前哭诉希望儿子能再见他们一面，但红孩儿除了落泪什么都不能做。通臂猿猴转世修成罗汉，万妖女王求了又求，只得到一句佛号。
佛教的放下是真放下，真正的六根清净，再不能回头。佛教故事里的皈依，除了像唐僧这种求佛，多的是武力渡化，强制皈依。不然那孔雀明王难道是疯了吗，不愿意自由自在，却去做人家的坐骑。
一入此门，四大皆空，滚滚红尘再不相干。这特喵是很多故事的基础设定，基础设定都不认，解构来解构去有什么意思。

今年夏天，美国东部的两种周期蝉——17年蝉和13年蝉将会同时爆发。这两种蝉在地下生活13年或17年后，同种蝉的若虫才会同时破土而出，完成生命周期。之所以选择17和13这两个大质数，是这两种蝉为了尽量避免同时爆发造成资源上的挤兑。他们只会在每隔17x13=221年时同时破土而出，而今年就是这样需要两三代人才能遇到的千载难逢的时刻。想必今年美东将会度过一个非常吵闹的夏天，大家千万不要错过！

是真的管用，他抱完之后离心机安静得像没在运行，我们认为是人体吸收了一些离心机的不规则震动之后它就可以自己保持平衡了。同事说他以前经常抱着离心机，因为从1000rpm升到3000的过程是最不稳的，很容易就报错停下了，但是升到3000基本就稳定了，所以他会在最危险的时候抱着离心机……我踏马……笑得……地崩山摧壮士死……